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利用小片段干擾核醣核酸抑制人類間質金屬蛋白酶1之表現

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200	1	\|a利用小片段干擾核醣核酸抑制人類間質金屬蛋白酶1之表現\|f黃春華撰
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215	0	\|a8,119葉\|c圖\|d30公分
300		\|a英文題名:Inhibition of Matrix Metalloproteinases 1 Expression by Small Interfering RNAs
300		\|a指導教授:陳俊宏,江善宗
320		\|a含參考書目
328		\|a碩士論文--靜宜大學化粧品科學學系碩士班
330		\|a第一型間質金屬蛋白酶 (Matrix metalloproteinase1, MMP1) 可分解細胞外間質而引起皮膚皺縮老化及癌症之轉移；而 RNAi 技術具有高效性、專一性地阻斷基因表達之功效，被認為是達到哺乳動物細胞基因緘默最有效的利器。本研究將人類纖維母細胞 (Detroit 551, BCRC 60118) 之total RNA萃取後，藉由 RT-PCR 及 PCR 技術已將第一型人類間質金屬蛋白酶的cDNA (MMP1 cDNA) 專一地成功複製。為了讓 RNA 干擾之效率或 MMP1 基因表現效率得以藉由螢光分析法加以偵測或定量，使用具有綠色螢光蛋白 (Green Fluorescent Protein, GFP) 編碼的報導系統做為表現載體，計畫將 MMP1 基因構築於 CMV (Human cytomegalovirus) 啟動子下游，接著將此構築好之 MMP1 - pAcGFP1-N3 表現載體轉染入人類黑色素瘤細胞 (MeWo, BCRC 60540) 中，然後再將化學合成的 siRNA 傳遞到細胞中，經過48小時培養後，於螢光分析儀中進行螢光數值的讀取。本研究至今已依據人類間質金屬蛋白酶第一型之 mRNA 序列及 RNA 干擾效率影響因子設計了 26 段高專一性的小片段雙股 RNA，每段的大小約 19 至 25 個核苷酸且 GC 含量約 30 至 50% 。其中 3 段小雙股 RNA 已由 Invitrogen 生技公司合成-357, 710 和 742 siRNAs。由報導系統的螢光數值結果顯示三段 siRNA 皆具有抑制螢光蛋白表現的能力，其中第710 siRNA的干擾效果更高達 90% 。接著將具有基因沉默效果的 siRNA 藉由轉染試劑的作用直接轉染入哺乳類細胞中，並藉由即時定量 PCR 與西方墨點法來分析是否具有抑制細胞中內生性 MMP1 基因的效果。此研究結果不只提供了 siRNA 研究技術之基礎數據，更提供了可抑制人類間質金屬蛋白酶第一型基因表現的 RNAi 資料。
517	1	\|aInhibition of Matrix Metalloproteinases 1 Expression by Small Interfering RNAs
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